Cytogenetická vyšetření
Vyšetření nádorového karyotypu
Provádí se pro stanovení získaných klonálních aberací v souvislosti se vznikem nádorového onemocnění. V Genetické laboratoři ÚLG se vyšetření nádorového karyotypu provádí z buněk kostní dřeně či periferní krve v souvislosti z hematologickými neopláziemi. Toto vyšetření má dle různých typů hemato-onkologického onemocnění význam diagnostický a/nebo prognostický.
Onkocytogenetické vyšetření ze vzorku periferní krve je vhodné indikovat pouze u pacientů s relativní lymfocytózou v krevním obraze v případě lymfoproliferačních onemocnění či s infiltrací blastů nad cca 30 % u akutních hemoblastóz.
Chromosomová analýza je provedena na buňkách kostní dřeně nebo periferní krve po krátkodobé cytogenetické kultivaci (24 - 72 hod). Základní kultivace využívá spontánního dělení neoplastických buněk in vitro, u některých typů hematologických neoplázií je vhodná stimulace buněčného dělení (CLL, ALL apod.).
Pokyny pro odběr materiálu jsou uvedeny v Laboratorní příručce.
Hodnocení karyotypu je prováděno mikroskopicky s následnou počítačovou obrazovou analýzou.
Vyšetření fluorescenční in situ hybridizací (FISH)
Molekulárně cytogenetická metoda prováděná zejména pro stanovení submikroskopických chromosomových aberací (delece, duplikace, kryptické translokace) a/nebo pro ověření a doplnění nálezu při vyšetření karyotypu. Mohou být vyšetřeny metafázní a/nebo interfázní jádra. V případě vyšetření nádorových buněk je zároveň i vhodnou metodou pro sledování úspěšnosti léčby.
Vyšetření je možné provádět na cytogenetických preparátech připravených pro analýzu karyotypu nebo stěru buněk bukální sliznice a obdobných preparátech.
Metoda FISH je založena na komplementárním párování vyšetřovaného chromosomového lokusu a fluorescenčně značené DNA sondy. Sondy mohou být lokusově specifické pro oblast jedinečné sekvence (např. genové sondy nebo sondy do subtelomerických oblastí), celochromosomové (pokrývají celý chromosom) nebo centromerické.
Hybridizace DNA ve vyšetřovaném lokusu a sondy probíhá po předchozí denaturaci teplem a/nebo působením organických roztoků přímo na mikroskopických sklech vyšetřovaného vzorku („in situ“). Po skončení hybridizace je přebytečná nenavázaná sonda odmyta (v reakci je vždy nadbytek sondy). Vhodně podbarvená jádra a počet či pozici fluorescenčně značených sond (signálů) hodnotíme pozorováním ve fluorescenčním mikroskopu s následnou počítačovou obrazovou analýzou.
Indikace FISH vyšetření je vždy založena na diagnóze uvedené na žádance o vyšetření nebo vyplývající z dostupných výsledků dalších vyšetření (např. cytologie, FACS, biopsie) nebo požadavku o vyšetření konkrétního chromosomového lokusu. Zásadní informace, které upřesňují nebo mění diagnózu, je možné kdykoli dodatečně sdělit laboratoři k domluvě o případné změně postupu vyšetření. Uvedený postup je v souladu s evropskými doporučeními ECA (Guidelines and Quality Assurance for Acquired Cytogenetics E.C.A. ECA Newsletter 2013;31:7-21.) a European recommendations and quality assurance for cytogenomic analysis of haematological neoplasms. (Leukemia,2018, https://doi.org/10.1038/s41375-019-0378-z).
Podrobnější orientaci v algoritmu vyšetření poskytuje připojená tabulka.
Vyšetření konstitučního karyotypu
Z buněk jednotlivých tkání (periferní krev (PK), včetně fetální krve (FK), plodová voda (PV), choriové klky a jiné produkty koncepce, např. potracené plody (FT)) se provádí pro stanovení konstituční chromosomové výbavy jedince, resp. plodu a jejích odchylek.
Vyšetření karyotypu z periferní a fetální krve je provedeno na T-lymfocytech periferní, resp. fetální krve po krátkodobé kultivaci buněk krve se selektivní stimulací buněčného dělení T-lymfocytů lektinem PHA a synchronizací buněčného dělení.
Vyšetření karyotypu z plodové vody a choriových klků nebo jiných produktů koncepce je provedeno na buňkách plodové vody (amniocytech), choriových klků nebo jiných produktů koncepce po dlouhodobé kultivaci v růstovém kultivačním médiu.
Pokyny pro odběr materiálu jsou uvedeny v Laboratorní příručce.
Zjištění patologického cytogenetického nálezu v buňkách plodové vody nebo produktů koncepce z probíhajícího těhotenství může být indikací k ukončení těhotenství do konce 24. týdne těhotenství z genetických důvodů.
Hodnocení karyotypu je prováděno mikroskopicky s následnou počítačovou obrazovou analýzou.
Vyšetření FISH
U konstitučního karyotypu se FISH využívá k vyšetření mikrodelečních syndromů, struktury marker chromosomů, přestaveb chromosomů včetně subtelomerických oblastí, mozaicismu aj.
Vyšetřované mikrodeleční syndromy
- syndrom mikrodelece chromosomu 22q11.2 (do této skupiny patří DiGeorgeův, velokardiofaciální, popř. Shprintzenův syndrom aj.)
- Praderův-Williho/Angelmanův syndrom- mikrodelece chromosomu 15q11-q13
- Williamsův-Beurenův syndrom – mikrodelece chromosomu 7q11.23
- Millerův-Diekerův syndrom – mikrodelece chromosomu 17p13.3
- Smithové-Magenisové syndrom – mikrodelece chromosomu 17p11.2
- Syndrom cri-du-chat - mikrodelece chromosomu 5p15.2
- Kallmannův syndrom – mikrodelece chromosomu Xp22.31
- X-vázaná ichtyóza – mikrodelece lokusu STS (steroidsulfatázového genu) na chromosomu Xp22.31
- delece, duplikace a translokace genu SHOX (Xp22.33; Yp11.3)
- mikrodelece a translokace regionu SRY (Yp11.2)
- další
Získané chromosomové aberace (ZCA)
Míra spontánně získaných strukturních chromosomových aberací v buňkách periferní krve odráží genotoxický vliv okolního prostředí (chemikálie, záření, viry, léky), příp. individuální citlivost na tyto klastogenní látky. Zvýšená hodnota ZCA je také spojená se syndromy se zvýšenou lomivostí chromosomů (nemoci spojené se sníženou funkcí reparačních enzymů) – např. Fanconiho anémie, Bloomův syndrom aj.
Pokyny pro odběr materiálu jsou uvedeny v Laboratorní příručce.
Vyšetření je prováděno u osob pracujících v rizikovém prostředí, po léčbě nádorového onemocnění a jako orientační u pacientů s podezřením na syndromy chromosomové instability.
Vyšetření ZCA se provádí na T-lymfocytech periferní krve po krátkodobé kultivaci buněk krve se selektivní stimulací buněčného dělení T-lymfocytů lektinem PHA. Dělení je zastaveno kolcemidem, dále je materiál zpracován a preparáty jsou barveny Giemsou.
Hodnocení je prováděno mikroskopicky s případnou počítačovou obrazovou dokumentací. Je hodnoceno minimálně 100 mitóz. Na metafázích jsou počítány zlomy chromatid, chromozomů, útvary vzniklé zlomy a případně jejich znovuspojením.
Za zvýšenou míru ZCA je považována hodnota 5 % a více aberantních mitóz. U zvýšených či hraničních výsledků je doporučena kontrola přibližně za půl roku.
Aktualizováno leden 2025